肝癌耐藥細(xì)胞的建立就是體外低濃度培養(yǎng)細(xì)胞,逐漸誘導(dǎo)耐藥。可是整個(gè)過程耗時(shí)長,易受污染,成功率一般。后來了解到還可以通過裸鼠荷瘤的方式，給裸鼠腹腔注射藥物逐漸誘導(dǎo)耐藥，zui后取瘤組織研碎制成細(xì)胞懸液在再培養(yǎng)幾代可得腫瘤細(xì)胞。這樣時(shí)間就縮短了很多~而且不受污染等條件限制。肝癌耐藥細(xì)胞的建立實(shí)驗(yàn)是通過細(xì)胞與低劑量的藥物長期接觸，引起細(xì)胞本身生物化學(xué)過程的改變，細(xì)胞膜上出現(xiàn)Pgp(或P-170)糖蛋白，使細(xì)胞逐漸對藥物耐受。
肝癌耐藥細(xì)胞培養(yǎng)小技巧:
1.買細(xì)胞要去靠譜的地方買，比如ATCC或者然泰生物。一般上面會(huì)有針對細(xì)胞的介紹，這樣培養(yǎng)之前可以了解細(xì)胞正常生長的狀態(tài)圖、傳代、培養(yǎng)基的類型等。
2.不管是買的細(xì)胞，還是別人惠贈(zèng)的細(xì)胞，剛拿到手趕緊的做兩件事：檢測是否有支原體污染;迅速擴(kuò)增凍存，凍存細(xì)胞復(fù)蘇后第二天更換一次培養(yǎng)基。
3.發(fā)現(xiàn)細(xì)胞有污染迅速處理掉，特別是當(dāng)你養(yǎng)了很多種細(xì)胞時(shí)。細(xì)菌污染、真菌污染很容易發(fā)現(xiàn)，支原體污染的話，細(xì)胞會(huì)長的慢，可以買個(gè)支原體檢測的試劑盒定期檢測一下。
4.不同細(xì)胞生長周期不同。有的生長很快，比如說MDA-MB-231，傳代的時(shí)候取離心懸液的十分之一就已經(jīng)足夠了。有的又是特別慢，比如BT474，傳代是一分二，復(fù)蘇起始的時(shí)候兩周多才能長滿。這就需要要在培養(yǎng)細(xì)胞的過程中多多摸索。
5.對于嬌弱的細(xì)胞，就得細(xì)心呵護(hù)。胰酶消化不能過久，吹得時(shí)候要輕柔，離心時(shí)候也要注意轉(zhuǎn)速和時(shí)間。每天都要去看一下細(xì)胞，肉眼觀察培養(yǎng)基狀況、顯微鏡下觀察細(xì)胞生長狀況。記住，是每天。
