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免疫熒光根據什么反應原理
更新時間:2017-11-22 點擊次數:1700次
   免疫熒光是標記免疫技術發展zui早的一種,它是在免疫學、生物化學和顯微鏡技術的基礎上建立起來的一項技術,通過將抗體與一些示蹤物質結合,利用抗原抗體反應進行組織或細胞內抗原物質的定位。免疫熒光步驟包括,細胞固定和通透,封閉,孵育一抗,二抗等。除了這些基本步驟,以下建議可以幫助您獲得更好的實驗結果。
  
  用熒光抗體示蹤或檢查相應抗原的方法稱熒光抗體法。用已知的熒光抗原標記物示蹤或檢查相應抗體的方法稱熒光抗原法。免疫熒光組織化學分直接法、間接法和補體法。
  
  某些抗原可以用熒光素標記,制成熒光抗原,標記熒光素的方法與制備熒光抗體方法相同。用熒光抗原可以直接檢查細胞或組織內的相應抗體,特異性較好,敏感性較差。染色方法同熒光抗體染色的直接法。由于多數抗原難以提純或量少不昂貴,一般很少采用此法。
  
  免疫熒光組織化學是根據抗原抗體反應的原理,先將已知的抗原或抗體標記上熒光素,再用這種熒光抗體(或抗原)作為探針檢查細胞或組織內的相應抗原(或抗體)。在細胞或組織中形成的抗原抗體復合物上含有標記的熒光素,熒光素受激發光的照射,由低能態進入高能態,而高能態的電子是不穩定的,以輻射光量子的形式釋放能量后,再回到原來的低能態,這時發出明亮的熒光(黃綠色或桔紅色),利用免疫熒光顯微鏡可以看見熒光所在的細胞或組織,從而確定抗原或抗體的性質和定位,以及利用定量技術測定含量。
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